Bordetella pertussis (Мокрота).

Бактерия Bordetella pertussis является возбудителем острой воздушно-капельной инфекции – коклюша. Заболеванию в большей мере подвержены дети в возрасте до двух лет, оно проявляется в виде приступообразного спазматического кашля. Вероятность заражения ребенка при контакте с носителем заболевания составляет 90%.

Существует ряд методов диагностики заболевания: бактериологический метод (посев бактерий на питательную среду), иммуноферментный анализ (ИФА), гематологический метод и молекулярно-генетический (ПЦР).

Метод выявления Bordetella pertussis с применением полимеразной цепной реакции (ПЦР) является одним из наиболее точных и специфичных. Чувствительность метода на ранних сроках течения болезни достигает 100%, тогда как классический метод бактериального посева работает на ранних стадиях только в 60% случаев.

Суть метода ПЦР-диагностики заключается в выявлении присутствия ДНК бактерии у пациента. Для этого у больного берется мазок из носоглотки или зева, или носоглоточный аспират (зависит от возраста ребенка и предполагаемой стадии заболевания). Из полученного материала выделяется вся присутствующая ДНК.

Далее проводится полимеразная цепная реакция (ПЦР) с праймерами (затравками), специфичными для данной бактерии. В результате ПЦР ограниченный праймерами кусочек бактериальной ДНК многократно дублируется.

Готовый ПЦР-продукт подвергают электрофорезу в агарозном геле. В том случае, если в пробе была ДНК бактерии и реакция прошла успешно, то при просвечивании агарозного геля в ультрафиолетовом свете будет видна яркая полоска (бэнд). Если ДНК бактерии в пробе не было, то реакция не пройдет и на агарозном геле светиться ничего не будет. Благодаря тому, что для успешного прохождения ПЦР достаточно очень малого количества ДНК, этот метод является наиболее точным из всех.

Сложность в постановке диагноза «коклюш» традиционными методами заключается в том, что кроме B. pertussis существуют еще две бактерии – B. bronchiseptica и B. parapertussis . Они очень похожи на B. pertussis, но вызывают другие заболевания – бронхисептикоз и паракоклюш, которые лечатся не так, как собственно коклюш. Поскольку праймеры специфичны именно к Bordetella pertussis, метод ПЦР позволяет избежать неправильной диагностики заболевания.

При наличии качественных реактивов и современного оборудования, метод ПЦР становится чрезвычайно простым, быстрым и точным.

Перед забором мазка на ПЦР желательно не принимать пищу в течение 2-3-х часов, можно пить воду.

Эффективность метода снижается на фоне приема пациентом антибиотиков. Поэтому ПЦР не может использоваться для диагностики результативности лечения на поздних сроках течения болезни. Для оценки результата лечения используют дополнительные клинические и лабораторные данные.