Mycobacterium tuberculosis (Кровь).

Полимеразная цепная реакция увеличивает количество ДНК бактерий и вирусов во множество раз за счет использования фермента ДНК-полимеразы. Для этого хватает всего одной ДНК.

С помощью ПЦР-диагностики появилась возможность обнаружить возбудителя на ранних стадиях заболевания, в особой биологической среде организма человека, установить количество имеющихся вирусов и бактерий.

Микобактерия туберкулеза представляет собой палочку, обладающую высокой патогенностью и вирулентностью. Эти специфические свойства заключаются в способности жить и размножаться в живом организм и вызывать развитие туберкулезной патологии.

ПЦР позволяет размножать в пробирке нуклеотидный фрагмент ДНК возбудителя за относительно короткое время в миллионы раз. Высокая чувствительность данного анализа подтверждается наличием единичных цепей молекул ДНК. Высокая специфичность ПЦР как основного диагностического метода объясняется особой нуклеотидной последовательностью участков в цепи молекулы ДНК. Это подтверждает генетическую уникальность микроба.

Высокая значимость этого диагностического метода подтверждается еще и тем, что микобактерии обладают медленным ростом: молекула ДНК удваивается в течение 24 часов.

Для ПЦР молекулы ДНК микобактерий выделяют из биоматериала в минимальном объеме при отсутствии ингибиторов ДНК-полимеразы.

Для проведения анализа необходимо создать условия, исключающие перекрестное загрязнение образцов. Для этого помещение обрабатывают ультрафиолетом, все поверхности — содержащими хлор средствами. Посуда должна быть одноразовой, обязательно использование стерильных медицинских перчаток.

Исследуемые пробы мокроты подготавливают особым образом — центрифугируют, осаждают, подогревают (для спинномозговой жидкости или бронхиального смыва) либо разжижают и центрифугируют (для мокроты).

Интерпретация результатов ПЦР осуществляется автоматически в ПЦР-анализаторах за счет считывания оптической плотности после ферментативной реакции.

Недостатком метода считается возможная контаминация образца внутри лаборатории короткими фрагментами ДНК. Это приводит к ложным результатам, так как попавшие молекулы являются дополнительной матрицей для ПЦР.

ПЦР-диагностика позволяет обнаружить микобактерии в клиническом материале достаточно быстро и поставить правильный диагноз туберкулез. Также этот метод является контрольным для определения эффективности лечения туберкулеза легких и внелегочной локализации.

Для внелегочных форм туберкулеза ПЦР-диагностика имеет особо важное значение, так как остальные традиционные рентгенологические и бактериологические методы малоэффективны.