ПЦР диагностика инфекций. Neisseria gonorrhoeae (Мокрота).
Полимеразная цепная реакция обнаруживает возбудителя гонореи на ранних этапах заболевания в любом исследуемом материале, в том числе и в мокроте. Для этого ПЦР увеличивает количество молекул ДНК за счет фермента ДНК-полимеразы. Кроме выявления возбудителя, проводится его количественное определение. Для этого достаточно одной молекулы ДНК.
Neisseria gonorrhoeae является возбудителем инфекционного заболевания, которое передается половым, бытовым, контактным и другими путями. Возбудитель обнаруживается в различных биологических средах организма: выделениях половых органов, отделяемом зева, на слизистых мочевыводящих путей, а также в мокроте.
ПЦР - диагностика помогает выявить возбудителя и поставить правильный диагноз тогда, когда другие методы диагностики не дают результатов.
В микробиологии ПЦР является наиболее точным, быстрым и безошибочным методом.
Высокая специфичность ПЦР - диагностики обеспечивает ее точность. В мокроте обнаруживается уникальный фрагмент молекулы ДНК, который характерен только для нейссерии гонореи. Это и свидетельствует об этиологической значимости данного возбудителя.
Высокая чувствительность метода заключается в том, что ПЦР определяет даже единичные клетки возбудителя гонореи в мокроте. Чувствительность колеблется от десяти до ста клеток возбудителя.
Отличительным моментом анализа ПЦР на гонорею является высокая скорость результатов. Это связано с тем, что для ПЦР не требуется выращивание культуры, ее выделение, на которое уходит много времени. Весь анализ ПЦР проводится максимум за пять часов.
С помощью ПЦР диагностируют не только острую гонорейную инфекцию, но и латентные, хронические формы, при которых бактериологические и бактериоскопические методы дают отрицательный результат. С помощью ПЦР проводят контроль эффективности лечения.
ПЦР - диагностика включает три важные процедуры:
• подготовка мокроты,
• собственно ПЦР,
• детекция ее результата.
Двадцать миллилитров мокроты собирают в одноразовый флакон и направляют в микробиологическую лабораторию для исследования.
Методика заключается в следующем: в пробирку с мокротой добавляют реагенты, которые в случае положительной пробы клонируют участок ДНК, имеющийся есть только у нейссерии гонореи. Если в пробирке реакция не произошла, значит, там нет возбудителя гонореи, и человек является здоровым, а ПЦР – отрицательной.